今天介绍一篇来自瓦赫宁根大学食品安全研究（WFSR）研究者的文章，题为：MolecularCharacterizationandEvent-SpecificReal-TimePCRDetectionofTwoDissimilarGroupsofGeneticallyModifiedPetunia(Petuniaxhybrida)SoldontheMarket。一种基于ALF（AmplificationofLinearly-EnrichedFragments）结合Sanger测序、纳米孔测序的转基因矮牵牛分子特征分析。

本文摘要

年春季，在欧洲市场上发现了具有不寻常橙色花朵的矮牵牛属植物，并被芬兰当局确认为转基因植物。年晚些时候，欧盟国家主管部门的几个官方实验室进行了检查和控制，发现了数个转基因矮牵牛品种，这些品种的花朵呈橙色，但也发现了另一组颜色异常的花。在后一组中，德国和荷兰当局发现了一个迄今未被发现的编码类黄酮35羟化酶（F35H）的基因，这表明市面上发现的矮牵牛花含有不同的基因结构。在这里，作者描述了一个策略来鉴定转基因矮牵牛品种。它的基础是使用（实时）PCR对已知元素进行最初的转基因筛选，然后通过一种称为ALF（线性富集片段扩增）的基因扩增方法结合Sanger和MinION测序对插入位点进行识别。结果表明，转基因矮牵牛的鉴定可以追溯到两个不同的转基因事件用于不同品种的育种。试验结果还证实，年德国首次田间试验使用的转基因矮牵牛花事件RL01-17并非市场上出售的转基因矮牵牛的原产地。根据获得的序列数据，开发并验证了事件特异性实时PCR确证方法。这些方法可用于常规分析中转基因矮牵牛的快速检测和鉴定。此外，还开发了一个决策支持系统，以揭示转基因矮牵牛花最可能的起源。

图1G1品种（A、B）和G2品种（C、D）的个别花代表

02

Methods

RealTimePCR

表1不同的Petunia提取的基因组DNA的

Target-specificPCR测试结果

G1品种对T-35S和T-ocs呈阳性，而G2品种对于这些元素是阴性。G2品种的另一个明显区别是存在T-nos元素，与G1品种相反（表1）。有趣的是，一些红花或紫花的花品种（如经典红花、约翰尼火焰和飞马紫色花）在元素和构建特异性的PCR测试中呈阴性，因此不是转基因植物，可能由于阳光照射导致花瓣颜色变化。

ALF：AmplificationofLinearly-EnrichedFragments

图2ALF原理示意图

参考：Ko?ir,A.B().ALF:astrategyforidentificationofunauthorizedGMOsin